Producción de embriones de bovinos in vitro : Estimulación de la síntesis de glutation durante la maduración in vitro de ocitos y su efecto sobre el desarrollo de los embriones

Durante la maduración in vivo de oocitos existe una activa síntesis de glutation (GSH) y cumple un rol importante en la fecundación y en el desarrollo embrionario,mediante su mecanismo de oxidación y reducción. En los sistemas de producción deembriones in vitro (PIV) la síntesis de GSH se encuentra...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: De Matos, Daniel Gustavo
Otros Autores: Guerrero, Graciela
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1999
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3135_DeMatos
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spelling tesis:tesis_n3135_DeMatos2023-10-02T19:45:12Z Producción de embriones de bovinos in vitro : Estimulación de la síntesis de glutation durante la maduración in vitro de ocitos y su efecto sobre el desarrollo de los embriones In vitro bovine embryo production : Stimulation of Glutathione Synthesis during bovine oocyte in vitro maduration and it's effects on embryo development De Matos, Daniel Gustavo Guerrero, Graciela Durante la maduración in vivo de oocitos existe una activa síntesis de glutation (GSH) y cumple un rol importante en la fecundación y en el desarrollo embrionario,mediante su mecanismo de oxidación y reducción. En los sistemas de producción deembriones in vitro (PIV) la síntesis de GSH se encuentra disminuida. Por ello, elobjetivo de la presente tesis fue estimular su síntesis durante la maduración in vitro (MIV) de oocitos bovinos y evaluar su efecto en el desarrollo de los embriones. Paraesto se puso a punto la técnica de PIV. Los resultados demostraron que: l) Durante la MIV de bovinos existe síntesis de GSH. 2) Dicha síntesis se puede incrementar con elagregado de cisteamina, β-mercaptoetanol, cistina o cisteína al medio de MIV. 3) Estogeneró incrementos del orden del 70% al 100 % en los porcentajes de desarrollo hastablastocistos. 4) Se aumentó la velocidad de desarrollo encontrándose más blastocistos aldia 6; siendo estos los mejores embriones para congelar. 5) Los niveles intracelulares de GSH generados durante la MIV, se mantienen durante la fecundación y reciéndesaparecen luego de los primeros estadios de desarrollo. 6) El desarrollo de losembriones es altamente dependiente de los niveles intracelulares de GSH alcanzadosdurante la MIV. 7) La cisteamina y la cisteína demostraron ser capaces de estimular lasíntesis de glutation aún en oocitos que carecen de células del cumulus. En conclusión, la estimulación de la síntesis de glutation durante la maduración invitro de oocitos bovinos incrementó tanto la tasa como la velocidad de desarrollo,obteniéndose más blastocistos al día 6 de cultivo in vitro siendo estos los más aptos parael congelamiento. Más aún, la cisteína o la cisteamina estimularon la síntesis de GSHen oocitos sin cumulus y en ausencia de un co-cultivo de células del cumulus. Esto esútil ya que aumenta la eficiencia de la técnica de PIV cuando se tienen oocitos con muypocas células del cumulus y se trabaja sin co-cultivo. There is an active synthesis of glutathione (GSH) during in vivo maturation and playsan important rol during fertilisation and embryo development due to its redox cycle. However, this synthesis is impaired during in vitro embryo production (IVP). Due tothis, the objective of the present thesis was to evaluate the effect of stimulating GSHsynthesis during bovine in vitro maturation (IVM) on embryo development. To do this,first of all we made the setup of the IVP technique. The experimental resultsdemonstrate that: l) Glutathione synthesis exists during IVM. 2) The addition ofcysteamine, β-mercaptoethanol, cystine or cysteine to the IVM medium stimulates GSHsynthesis. 3) An increase on embryo development (70-100%) was observed when GSHsynthesis was stimulated during IVM. 4) Due to this stimulation, more embryosappeared at day 6 and these embryos were the best for cryopreservation. 5) Theintracellular GSH levels obtained after stimulation its synthesis during IVM, continueafter fertilisation and disappeared during the first stages of embryo development. 6) Embryo development depends on the intracellular oocyte GSH levels after IVM. 7) Moreover, cysteamine and cysteine can stimulate GSH synthesis in oocytes withoutcumulus cells. In conclusion, GSH synthesis stimulation during bovine oocyte IVM increases therate of embryo development and more embryos developed faster and reached theblastocyst stage at day 6 of cultured being these the most suitable for freezing. Moreover, these results demonstrate that cysteine or cysteamine stimulate GSHsynthesis in oocytes without cumulus mass and in the absence of a cumulus cellmonolayer. This may be useful to increase the efficacy of IVM of those oocytes havingfew cumulus cell layers, in a system without co-culture. Fil: De Matos, Daniel Gustavo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1999 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3135_DeMatos