Estudio del impacto de la modulación de galectina-1 endógena en la inducción de la tolerancia inmunológica en cáncer de próstata y desarrollo de una estrategia original de inmunoterapia.

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La identificación de nuevas terapias eficaces para el tratamiento del cáncer de próstata (CaP) requiere una mejor comprensión de las múltiples interacciones moleculares entre las células tumorales y su microambiente asociado. En este contexto, la galectina-1 (Gal-1) es una molécula clave en la deter...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Corapi, Enrique Sebastián
Otros Autores: Läderach, Diego José
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2020
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6908_Corapi
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n6908_Corapi_oai
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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Esta tesis muestra aspectos originales de esta lectina centrándose en el papel de la Gal-1 endógena de los linfocitos en el control la respuesta inmune en un contexto de CaP. Usando un modelo murino preclínico de CaP in vitro, nuestros resultados logran demostrar que la Gal-1 endógena de los linfocitos modula su tasa de proliferación y función citotóxica, mismo en condiciones de alta concentración extracelular de Gal-1, la cual es principalmente secretada por las células tumorales. En tales condiciones, la ausencia de Gal-1 en los linfocitos T potencia la respuesta inmune antitumoral. Un estudio más detallado demostró que la Gal-1 endógena en los linfocitos T CD4+, pero principalmente en las células T CD8+, actúa como un regulador negativo de la inmunidad antitumoral. El desafío tumoral in vivo luego de una transferencia adoptiva de linfocitos salvajes o carentes de Gal-1 a ratones Nude, mostró que cuando esta lectina está ausente en los linfocitos transferidos se produce un retraso en la cinética de aparición y una menor tasa de duplicación de los tumores. En resumen, se demostró que los tumores de próstata requieren de Gal-1 en los linfocitos para evadir las respuestas inmunes, por lo que a partir de este conocimiento básico, nos propusimos desarrollar un método para regular negativamente la expresión intrínseca de esta galectina específicamente en los linfocitos T. Bajo las premisas que debe ser de utilización simple, con reproducibilidad biológica, aplicable tanto a situaciones in vitro como in vivo, específico para el blanco celular de interés (en nuestro caso los linfocitos T CD8+) y aplicable a sistemas murinos como humanos para mejorar su carácter traslacional, desarrollamos una herramienta molecular. Consiste en un ARN quimérico que acopla un shRNA específico contra Gal-1 (que es capaz de regular negativamente la expresión de esta lectina en un 90%, tanto en células murinas como humanas), a un aptámero 4-1BB capaz de interactuar de manera específica con linfocitos T CD8+ activados. El análisis de las propiedades funcionales en los linfocitos T CD8+ tanto in vivo como in vitro arrojó resultados análogos a los obtenidos en el modelo de ratones deficientes, sentando las bases para una potencial inmunoterapia original en CaP. The identification of effective new therapies for prostate cancer (PCa) requires a better understanding of the multiple molecular interactions between tumor cells and their associated microenvironment. In this context, galectin-1 (Gal-1) is a key molecule in the determination of the prostatic carcinoma microenviroment; therefore, it is essential to understand all the molecular processes in which this protein is involved. Most of the previous studies found in the literature have focused on the microenvironment remodeling properties of tumor-secreted Gal-1, through its interactions with the glyco-receptors at the cell membrane and the extracellular matrix. This thesis shows original aspects of the lectin by focusing on the role of lymphocyte endogenous Gal-1 in controlling anti-prostate tumor immunity. Using a murine preclinical model of prostate cancer, our results demonstrate that endogenous Gal-1 in lymphocytes modulates their proliferative rate and cytotoxic function in conditions of high extracellular Gal-1 concentration, mainly secreted by the tumor cells. In such conditions, the absence of Gal-1 in T lymphocytes potentiates anti-tumor immune responses. Further studies demonstrated that endogenous Gal-1 in CD4+, but mainly in CD8+ T cells, acts as a negative regulator of anti-tumor immunity. The in vivo tumor challenge after an adoptive transfer of wild type or Gal-1 lacking lymphocytes into Nude mice, showed that when this lectin is absent in the transferred lymphocytes, there is a delay in the kinetics of appearance and a lower duplication rate of the tumors. In summary, it was shown that prostate tumors require Gal-1 in the lymphocytes to evade immune responses, based on this basic knowledge; we develop a method to negatively regulate the intrinsic expression of this galectin specifically in T lymphocytes. This method should be simple to use, with biological reproducibility, applicable in both in vitro and in vivo situations, specific for the target cell of interest (in our case the CD8+ T lymphocytes) and applicable to murine systems and humans to improve its translational character. Accordingly developed an RNA 4-1BB shGal-1 (Apt 4-1BB/shGal-1) aptameric chimera, using a specific shRNA against Gal- 1 which is capable of downregulating the expression of this lectin by 90%, both in murine and human cells, coupled to an 4-1BB aptamer capable of interacting specifically with activated CD8+ T lymphocytes. The analysis of functional properties in CD8+ T lymphocytes both in vivo and in vitro yielded results analogous to those obtained in the KO model, laying the groundwork for an original potential immunotherapy in PCa. Fil: Corapi, Enrique Sebastián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. application/pdf https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6908_Corapi spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales info:eu-repo/semantics/restrictedAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar Estudio del impacto de la modulación de galectina-1 endógena en la inducción de la tolerancia inmunológica en cáncer de próstata y desarrollo de una estrategia original de inmunoterapia. Study of the impact of endogenous galectin-1 modulation in the induction of immunological tolerance in prostate cancer and development of an original immunotherapy strategy. info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n6908_Corapi_oai

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