Caracterización del RNA ribosomal 28S del roedor Ctenomys : Primera evidencia en vertebrados de un rRNA que sufre fragmentación y splicing

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Esta Tesis Doctoral se basa en la caracterización del RNA ribosomal 288 en los roedores del género Ctenomys. Hallamos que en lugar de estar formado por una única molécula de 4,4 kb, este RNA está fragmentado en dos moléculas de 2,6 y 1,8 kb. Estas dos especies se mantienen apareadas por complementar...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Melen, Gustavo J.
Otros Autores: Kornblihtt, Alberto Rodolfo
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2001
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3396_Melen
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n3396_Melen_oai
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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spelling I28-R145-tesis_n3396_Melen_oai2023-08-03 Kornblihtt, Alberto Rodolfo Melen, Gustavo J. 2001 Esta Tesis Doctoral se basa en la caracterización del RNA ribosomal 288 en los roedores del género Ctenomys. Hallamos que en lugar de estar formado por una única molécula de 4,4 kb, este RNA está fragmentado en dos moléculas de 2,6 y 1,8 kb. Estas dos especies se mantienen apareadas por complementariedad de bases intercatenaria formando Ia subunidad mayor ribosomal. Este fenómeno fue observado en todos los órganos estudiados excepto en testículo, cuyo rRNA muestra, además de los fragmentos, Ia molécula intacta del rRNA 288. Encontramos que al segmento DG(lugar físico que alberga el sitio de clivaje) del cDNA le falta un tracto de 106 nucleótidos que en Ia región genómica correspondiente se encuentra delimitada por una repetición directa de 9 bases. Además, dentro de este tracto se encuentra el sitio de fragmentación. Ensayos de protección a Ia nucleasa S1 demostraron que este segmento de expansión más corto existe en preparaciones de RNA total y el hecho de que las amplificaciones genómicas generen un único producto y que experimentos de Southern Blot muestren una única banda correspondiente al segmento de expansión DS nos condujo a la idea del splicing como mecanismo generador de la especie no clivada en testículo. A pesar de que intentamos reproducir la maduración del rRNA in vitro e in vivo y no lo conseguimos, el splicing sigue siendo el único mecanismo que puede explicar la aparición de más de un RNA maduro a partir de un único DNA molde. Parte de los resultados que aquí se muestran fueron publicados en: Melen GJ, Pesce CG, Rossi MS, KornblihttAR (1999). Novel processing in a mammalian nuclear 288 pre-rRNA: tissue-specific elimination of an “intron” bearing a hidden break site. EMBO J 18: 3107-3118. This Doctoral Thesis deals with the characterization of the 288 ribosomal RNAfrom South American rodents of the genus Ctenomys. We found that, instead being a single 4,4 kb entity, this RNA is split in two molecules of 2,6 and 1,8 kb. These two species are kept together by base complementation giving rise to the large ribosomal subunit. This phenomenon was observed in aII studied organs aside from testis, where a LSU rRNAintact molecule appears together with the fragmented one. We established that ¡n the testis uvcleaved version, segment DG (the physical place where the splitting occurs) Iacks a 106 bases track; while its genomic counterpart is flanked by a 9-bp direct repeat. S1 protection assays showed that this shorter expansion segment does exist in total RNA preparations and the fact that genomic amplifications yielded an unique product and Southern Blots revealed only one band corresponding to expansion segment DG, suggest that a splicing mechanism generates the uncleaved version in testis. Although we were not able to accomplish RNA maturation in vitro neither ¡n vivo, splicing is still the exclusive mechanism which make possible the generation of more than one mature RNA coming from the same DNAtemplate. Part of the results showed here were published in: Melen GJ, Pesce CG, Rossi MS, Kornblihtt AR (1999). Novel processing in a mammalian nuclear 288 pre-rRNA: tissue-specific elimination of an "intron” bearing a hidden break site. EMBO J 18: 3107-3118. Fil: Melen, Gustavo J.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. application/pdf https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3396_Melen spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar Caracterización del RNA ribosomal 28S del roedor Ctenomys : Primera evidencia en vertebrados de un rRNA que sufre fragmentación y splicing info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n3396_Melen_oai
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