Valoración de nistatina residual en alimentos aplicando un nuevo método

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En el presente trabajo se determina un nuevo método, deltipo turbidimétrico, para la valoración de la actividad de la nistatina,antibiótico fungicida obtenido por fermentacion del Streptomyces neursei, y se efectúan ensayos de aplicación de la misma enla conservacion de vegetales, determinandolos va...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal:	Cerdán, Carlos Julio
Otros Autores:	Montes, Adolfo L.
Formato:	Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:	Español
Publicado:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1958
Acceso en línea:	https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n0984_Cerdan http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n0984_Cerdan_oai
Aporte de:	Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires

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La idea inicial fué probar la eficacia del germen de ensayo y el medio de cultivo del mismo utilizados para el método de difusión en agar condicionándolos para obtener un procedimiento rápido para la valoración del antibiótico con lo que se logrará ademásde rapidez, mayor exactitud y economía (menor número de operadores, de material, medios, etc.) FUNDAMENTO DEL ENSAYO A DESARROLLAR: Medir el grado de crecimientodel germen (Saccharomyces Cerevisiae A.T.C.C. 9763) en función de distintas concentraciones de antibióticos standard; trazar con las dos variables una curva (curva standard) y leer en ella los valores delgrado de crecimiento obtenidos con la muestra problema los que, mediante el cálculo correspondiente, darán la potencia buscada. DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE INOCULO Y EL TIEMPO DE INCUBACION NECESARIO OBJETO: Determinar si con las condiciones impuestas es posible obtenerun crecimiento del germen de ensayo que haga factible la ejecución del método proyectado y elegir las más convenientes. CONCLUSIONES: a) Las condiciones impuestas permiten el crecimientoadecuado del microorganismo de ensayo. b) Las condiciones elegidas son: concentración de inóculo: 6%; tiempode incubación 37°C: 3 horas. II.- ELECCION DEL SOLVENTE APROPIADO PARA LA DISOLUCION DEL ANTIBIOTICO A DOSAR. a) ESTUDIO DE LA MISCIBILIDAD EN AGUA DE LOS POSIBLES SOLVENTES A UTILIZAR. OBJETO: Delimitar los solventes en los que se determinarán luego,la solubilidad del antibiótico. b) PRUEBA DE LA SOLUBILIDAD DE LA NISTATINA EN LOS SOLVENTES ELEGIDOS. OBJETO: Estudiar comparativamente, dentro de las condiciones requeridas para el ensayo, la disolución del antibiótico en los solventesdefinidos en el ensayo anterior. c) INTERFERENCIA EN EL CRECIMIENTO DEL GERMEN DE ENSAYO DE AQUELLOS SOLVENTES QUE CUMPLAN LAS CONDICIONES DE LOS ITEMS a y b. OBJETO: Seleccionar aquellos solventes que no modifiquen el normaldesarrollo del germen durante el período de incubación del ensayo. d) DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE ANTIBIOTICO A UTILIZAR EN LOS ENSAYOS. OBJETO: Determinar si dentro de las limitaciones establecidas en losapartados anteriores, es posible obtener una concentración de antibiótico conveniente, para la realización del ensayo. e) ESTABILIDAD DE LA NISTATINA EN LOS SOLVENTES NO INTERFERENTES. OBJETO: Elegir el solvente que produzca la menor variación en la actividad biológica del antibiótico durante el mayor tiempo posiblecon lo que se logrará: 1) Eliminar del método los errores que seproducirían por la variación de la potencia del antibiótico duranteel tiempo de ensayo. y 2) Usar la solución standard en más de unensayo con las consiguientes ventajas de comparación de datos y economía. f) CONTROL DE LA SOLUBILIDAD DEL ANTIBIOTICO EN EL SOLVENTE FINALELNTE ELEGIDO. OBJETO: Asegurar que la nistatina en las condiciones definidas sedisuelve totalmente. CONCLUSIONES: De los ensayos realizados se determina: a) Como solvente más conveniente la mezcla al 50% de propilenglicolmetanol. b) La concentración de la solución de antibiótico a utilizar deberáestar comprendida entre 100 y 200 u/ml. c) Se establece como tiempo máximo de conservación de una soluciónstock de concentración 4.000 u/ml de nistatina en el solventeelegido: 3 días. III.- DETERMINACION DE LAS CONDICIONES DEFINITIVAS DE ENSAYO. OBJETO: Considerando las experiencias anteriores, determinar lascondiciones óptimas de ensayo (concentración de inóculo y tiempode incubación). CONCLUSIONES: Se confirman las condiciones primarias determinadasanteriormente (concentración de inóculo: 6% y tiempo de incubacióna 37°C: 3 horas). SEGUNDA PARTE: REPRODUCIBILIDAD DEL METODO EN LAS CONDICIONES QUE PERMITAN SU APLICACION PARA LA DETERMINACION DE VALORES RESIDUALES EN ALIMENTOS. I.- REPRODUCIBILIDAD DE DATOS. OBJETO: Determinar si la variación de los resultados obtenidos conla aplicación del método definido para las condiciones convenientes,está dentro de los límites aceptados para este tipo de ensayos. CONCLUSIONES: Realizados 188 ensayos individuales se obtiene comovariación máxima de las potencias obtenidas un 4,2%. Este valor está dentro de lo exigido para este tipo de métodos. II.- COMPARACION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EL PRESENTE METODO Y EL DE DIFUSION EN PLACAS DE AGAR. OBJETO: Determinar si los valores de la actividad biológica de lamuestra, resultantes del ensayo de reproducibilidad de datos, concuerdancon los obtenidos con el método de difusión en placas deagar al que se considera como referencia por ser el de uso común enla actualidad. CONCLUSIONES: Los resultados obtenidos con los dos métodos son comparables. TERCERA PARTE: ENSAYOS DE APLICACION DE LA NISTATINA PARA LA CONSERVACION TEMPORARIA DE FRUTAS Y HORTALIZAS. I) EFECTO CONSERVADOR EN ACELGA, TOMATE, LIMON Y UVAS. OBJETO: Determinar si la aplicación de una solución de nistatina sobre estos alimentos tiene algún efecto benéfico en su conservación. CONCLUSIONES: Se determina una evidente acción conservadora del antibióticoen tomate y limón en los que, luego de un tratamiento conuna solución de 100 ppm de nistatina, no se observó la aparición dehongos contaminantes hasta 4 a 5 días después de su aparición en loscontroles. En uva, en casi todos los ensayos, las frutas tratadasse mantuvieron alrededor de 1 día más que en los controles sin presentaraparición de hongos siendo además en ellas la cantidad de contaminantes menor. II) VALORACION DEL ANTIBIOTICO RESIDUAL APLICANDO EL METODO ENSAYADO. OBJETO: Determinar la cantidad de nistatina residual que hay en cada uno de los vegetales tratados con el antibiótico, y su variaciónen función del tiempo, aplicando el método de valoración rápida ensayado. CONCLUSIONES: Luego del secado de la solución de 100 ppm. agregadaa los alimentos, en el que la potencia se reduce aproximadamenteun 40%, la actividad del antibiótico residual se mantiene con valores aceptables hasta los 7 días, no se observaron interferencias entre los vegetales ensayados y la nistatina.
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La idea inicial fué probar la eficacia del germen de ensayo y el medio de cultivo del mismo utilizados para el método de difusión en agar condicionándolos para obtener un procedimiento rápido para la valoración del antibiótico con lo que se logrará ademásde rapidez, mayor exactitud y economía (menor número de operadores, de material, medios, etc.) FUNDAMENTO DEL ENSAYO A DESARROLLAR: Medir el grado de crecimientodel germen (Saccharomyces Cerevisiae A.T.C.C. 9763) en función de distintas concentraciones de antibióticos standard; trazar con las dos variables una curva (curva standard) y leer en ella los valores delgrado de crecimiento obtenidos con la muestra problema los que, mediante el cálculo correspondiente, darán la potencia buscada. DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE INOCULO Y EL TIEMPO DE INCUBACION NECESARIO OBJETO: Determinar si con las condiciones impuestas es posible obtenerun crecimiento del germen de ensayo que haga factible la ejecución del método proyectado y elegir las más convenientes. CONCLUSIONES: a) Las condiciones impuestas permiten el crecimientoadecuado del microorganismo de ensayo. b) Las condiciones elegidas son: concentración de inóculo: 6%; tiempode incubación 37°C: 3 horas. II.- ELECCION DEL SOLVENTE APROPIADO PARA LA DISOLUCION DEL ANTIBIOTICO A DOSAR. a) ESTUDIO DE LA MISCIBILIDAD EN AGUA DE LOS POSIBLES SOLVENTES A UTILIZAR. OBJETO: Delimitar los solventes en los que se determinarán luego,la solubilidad del antibiótico. b) PRUEBA DE LA SOLUBILIDAD DE LA NISTATINA EN LOS SOLVENTES ELEGIDOS. OBJETO: Estudiar comparativamente, dentro de las condiciones requeridas para el ensayo, la disolución del antibiótico en los solventesdefinidos en el ensayo anterior. c) INTERFERENCIA EN EL CRECIMIENTO DEL GERMEN DE ENSAYO DE AQUELLOS SOLVENTES QUE CUMPLAN LAS CONDICIONES DE LOS ITEMS a y b. OBJETO: Seleccionar aquellos solventes que no modifiquen el normaldesarrollo del germen durante el período de incubación del ensayo. d) DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE ANTIBIOTICO A UTILIZAR EN LOS ENSAYOS. OBJETO: Determinar si dentro de las limitaciones establecidas en losapartados anteriores, es posible obtener una concentración de antibiótico conveniente, para la realización del ensayo. e) ESTABILIDAD DE LA NISTATINA EN LOS SOLVENTES NO INTERFERENTES. OBJETO: Elegir el solvente que produzca la menor variación en la actividad biológica del antibiótico durante el mayor tiempo posiblecon lo que se logrará: 1) Eliminar del método los errores que seproducirían por la variación de la potencia del antibiótico duranteel tiempo de ensayo. y 2) Usar la solución standard en más de unensayo con las consiguientes ventajas de comparación de datos y economía. f) CONTROL DE LA SOLUBILIDAD DEL ANTIBIOTICO EN EL SOLVENTE FINALELNTE ELEGIDO. OBJETO: Asegurar que la nistatina en las condiciones definidas sedisuelve totalmente. CONCLUSIONES: De los ensayos realizados se determina: a) Como solvente más conveniente la mezcla al 50% de propilenglicolmetanol. b) La concentración de la solución de antibiótico a utilizar deberáestar comprendida entre 100 y 200 u/ml. c) Se establece como tiempo máximo de conservación de una soluciónstock de concentración 4.000 u/ml de nistatina en el solventeelegido: 3 días. III.- DETERMINACION DE LAS CONDICIONES DEFINITIVAS DE ENSAYO. OBJETO: Considerando las experiencias anteriores, determinar lascondiciones óptimas de ensayo (concentración de inóculo y tiempode incubación). CONCLUSIONES: Se confirman las condiciones primarias determinadasanteriormente (concentración de inóculo: 6% y tiempo de incubacióna 37°C: 3 horas). SEGUNDA PARTE: REPRODUCIBILIDAD DEL METODO EN LAS CONDICIONES QUE PERMITAN SU APLICACION PARA LA DETERMINACION DE VALORES RESIDUALES EN ALIMENTOS. I.- REPRODUCIBILIDAD DE DATOS. OBJETO: Determinar si la variación de los resultados obtenidos conla aplicación del método definido para las condiciones convenientes,está dentro de los límites aceptados para este tipo de ensayos. CONCLUSIONES: Realizados 188 ensayos individuales se obtiene comovariación máxima de las potencias obtenidas un 4,2%. Este valor está dentro de lo exigido para este tipo de métodos. II.- COMPARACION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EL PRESENTE METODO Y EL DE DIFUSION EN PLACAS DE AGAR. OBJETO: Determinar si los valores de la actividad biológica de lamuestra, resultantes del ensayo de reproducibilidad de datos, concuerdancon los obtenidos con el método de difusión en placas deagar al que se considera como referencia por ser el de uso común enla actualidad. CONCLUSIONES: Los resultados obtenidos con los dos métodos son comparables. TERCERA PARTE: ENSAYOS DE APLICACION DE LA NISTATINA PARA LA CONSERVACION TEMPORARIA DE FRUTAS Y HORTALIZAS. I) EFECTO CONSERVADOR EN ACELGA, TOMATE, LIMON Y UVAS. OBJETO: Determinar si la aplicación de una solución de nistatina sobre estos alimentos tiene algún efecto benéfico en su conservación. CONCLUSIONES: Se determina una evidente acción conservadora del antibióticoen tomate y limón en los que, luego de un tratamiento conuna solución de 100 ppm de nistatina, no se observó la aparición dehongos contaminantes hasta 4 a 5 días después de su aparición en loscontroles. En uva, en casi todos los ensayos, las frutas tratadasse mantuvieron alrededor de 1 día más que en los controles sin presentaraparición de hongos siendo además en ellas la cantidad de contaminantes menor. II) VALORACION DEL ANTIBIOTICO RESIDUAL APLICANDO EL METODO ENSAYADO. OBJETO: Determinar la cantidad de nistatina residual que hay en cada uno de los vegetales tratados con el antibiótico, y su variaciónen función del tiempo, aplicando el método de valoración rápida ensayado. CONCLUSIONES: Luego del secado de la solución de 100 ppm. agregadaa los alimentos, en el que la potencia se reduce aproximadamenteun 40%, la actividad del antibiótico residual se mantiene con valores aceptables hasta los 7 días, no se observaron interferencias entre los vegetales ensayados y la nistatina. Fil: Cerdán, Carlos Julio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. application/pdf https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n0984_Cerdan spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar Valoración de nistatina residual en alimentos aplicando un nuevo método info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n0984_Cerdan_oai

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