Geração de uma colônia de camundongos transgênicos homozigotos K18-hACE2 para avaliação de vacina e candidatos terapêuticos contra SARS-CoV-2
O SARS-CoV-2 é o agente etiológico responsável pela doença COVID-19 que iniciou uma pandemia desde o final de 2019. Existem diferentes modelos animais para esta doença, sendo o modelo de camundongo transgênico K18-hACE2, originalmente desenvolvido para o estudo de SARS-CoV-1, de grande relevância no...
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Universidad Nacional del Litoral
2022
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K18-hACE2 genotyping preclinical model COVID-19 K18-hACE2 genotipificación modelo preclínico COVID-19 K18-hACE2 COVID-19 BERENGENO, Andrea MATILLER, Valentina DIAZ, Pablo U. REBELINDO, Enrique RODRIGUEZ, F. M. ANWEG, Ayelen SILVESTRINI, P. CATTANEO, M. L. PERALTA, M. B. DURANTE, L. I. NOTARO, Ulises S. CAINELLI, S. TABORDA, P. STALDER, V. ETCHEVERS, L. REY, Florencia SALVETTI, Natalia R. ORTEGA, Hugo H. Geração de uma colônia de camundongos transgênicos homozigotos K18-hACE2 para avaliação de vacina e candidatos terapêuticos contra SARS-CoV-2 |
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O SARS-CoV-2 é o agente etiológico responsável pela doença COVID-19 que iniciou uma pandemia desde o final de 2019. Existem diferentes modelos animais para esta doença, sendo o modelo de camundongo transgênico K18-hACE2, originalmente desenvolvido para o estudo de SARS-CoV-1, de grande relevância no contexto atual. Considerando que os camundongos são comercializados como hemizigotos e dada a ausência de camundongos homozigotos para o transgene K18-hACE2, o objetivo deste trabalho foi gerar uma colônia de camundongos homozigotos K18-hACE2-Tg/Tg sob condições ambientais controladas. Para o F1, foram utilizados 10 camundongos hemizigóticos (7 fêmeas e 3 machos), com 6-8 semanas de idade, do The Jackson Laboratory (EUA). Dos F1, 78 animais foram identificados por genotipagem por PCR: 62 hemizigóticos (Tg/0) e 16 selvagens (0/0). Os animais identificados como transgênicos foram cruzados com camundongos C57BL/6J para selecionar os genitores homozigotos que geraram 100% de hemizigotos na F2. Dos 224 filhotes analisados, foram obtidos 7 genitores homozigotos K18-hACE2-Tg/Tg, que foram utilizados para a colônia de fundação de camundongos homozigotos K18-hACE2-Tg/Tg. O modelo de camundongo homozigoto K18-hACE2-Tg/Tg desenvolvido neste trabalho pode ser usado para estudar a patogênese da doença e a avaliação de possíveis terapêuticas contra SARS-CoV-2. |
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I26-R133-article-112122022-03-04T16:00:10Z Geração de uma colônia de camundongos transgênicos homozigotos K18-hACE2 para avaliação de vacina e candidatos terapêuticos contra SARS-CoV-2 Generation of a colony of homozygous K18-hACE2 transgenic mice for the evaluation of vaccine and therapeutic candidates against SARS-CoV-2 Generación de una colonia de ratones transgénicos homocigotas K18-hACE2 para la evaluación de candidatos vacunales y terapéuticos contra el SARS-CoV-2 BERENGENO, Andrea MATILLER, Valentina DIAZ, Pablo U. REBELINDO, Enrique RODRIGUEZ, F. M. ANWEG, Ayelen SILVESTRINI, P. CATTANEO, M. L. PERALTA, M. B. DURANTE, L. I. NOTARO, Ulises S. CAINELLI, S. TABORDA, P. STALDER, V. ETCHEVERS, L. REY, Florencia SALVETTI, Natalia R. ORTEGA, Hugo H. K18-hACE2 genotyping preclinical model COVID-19 K18-hACE2 genotipificación modelo preclínico COVID-19 K18-hACE2 COVID-19 O SARS-CoV-2 é o agente etiológico responsável pela doença COVID-19 que iniciou uma pandemia desde o final de 2019. Existem diferentes modelos animais para esta doença, sendo o modelo de camundongo transgênico K18-hACE2, originalmente desenvolvido para o estudo de SARS-CoV-1, de grande relevância no contexto atual. Considerando que os camundongos são comercializados como hemizigotos e dada a ausência de camundongos homozigotos para o transgene K18-hACE2, o objetivo deste trabalho foi gerar uma colônia de camundongos homozigotos K18-hACE2-Tg/Tg sob condições ambientais controladas. Para o F1, foram utilizados 10 camundongos hemizigóticos (7 fêmeas e 3 machos), com 6-8 semanas de idade, do The Jackson Laboratory (EUA). Dos F1, 78 animais foram identificados por genotipagem por PCR: 62 hemizigóticos (Tg/0) e 16 selvagens (0/0). Os animais identificados como transgênicos foram cruzados com camundongos C57BL/6J para selecionar os genitores homozigotos que geraram 100% de hemizigotos na F2. Dos 224 filhotes analisados, foram obtidos 7 genitores homozigotos K18-hACE2-Tg/Tg, que foram utilizados para a colônia de fundação de camundongos homozigotos K18-hACE2-Tg/Tg. O modelo de camundongo homozigoto K18-hACE2-Tg/Tg desenvolvido neste trabalho pode ser usado para estudar a patogênese da doença e a avaliação de possíveis terapêuticas contra SARS-CoV-2. SARS-CoV-2 is the causative etiological agent of the COVID-19 disease that started a pandemic in late 2019. Among different animal models for this disease, the K8-hACE2 transgenic mouse model, originally developed for the study of SARS-CoV-1, proved to be of great relevance in the current context. Considering that those mice are marketed as hemizygous and given that homozygous mice for the K18-hACE2 transgene are not commercially available, this work aimed to describe the creation of a colony of homozygous K18-hACE2-Tg/Tg mice under controlled environmental conditions. For the F1 progeny 10 hemizygous mice (7 females and 3 males), between 6-8 weeks of age, from The Jackson Laboratory (USA) were used. From the F1, 78 animals were identified by PCR genotyping: 62 hemizygous (Tg/0) and 16 wild types (0/0). Those animals identified as transgenic were crossed with C57BL/6J mice to select the homozygous parents that generated 100% hemizygous in F2. From a total of 224 analyzed offspring, 7 homozygous K18-hACE2-Tg/Tg parents were obtained, which were used for the foundation colony of homozygous K18-hACE2-Tg/Tg mice. The homozygous K18-hACE2-Tg/Tg mouse colony developed in this work will be able to use for the study of pathogenesis and the evaluation of possible therapeutics against SARS-CoV-2. EL SARS-CoV-2 es el agente etiológico responsable de la enfermedad COVID-19 que inició una pandemia desde finales de 2019. Existen distintos modelos animales para esta enfermedad siendo el modelo de ratón transgénico K18-hACE2, originalmente desarrollado para el estudio del SARS-CoV-1, de gran relevancia en el contexto actual. Considerando que los ratones se comercializan como hemicigotas y dada la ausencia de ratones homocigotas para el transgén K18-hACE2, el objetivo de este trabajo fue generar una colonia de ratones homocigotas K18-hACE2-Tg/Tg bajo condiciones ambientales controladas. Para la F1 se utilizaron 10 ratones hemicigotas (7 hembras y 3 machos), de 6-8 semanas de edad, provenientes de The Jackson Laboratory (USA). De la F1 se identificaron mediante genotipificación por PCR 78 animales: 62 hemicigotas (Tg/0) y 16 salvajes (0/0). Aquellos animales identificados como transgénicos se cruzaron con ratones C57BL/6J para seleccionar los parentales homocigotas que generaron 100% de hemicigotas en la F2. De 224 crías analizadas, se obtuvieron 7 parentales homocigotas K18-hACE2-Tg/Tg que fueron utilizados para la colonia fundación de ratones homocigotas K18-hACE2-Tg/Tg. El modelo de ratón homocigota K18-hACE2-Tg/Tg desarrollado en este trabajo podrá ser empleado para el estudio de la patogénesis de la enfermedad y la evaluación de posibles terapéuticos contra el SARS-CoV-2 Universidad Nacional del Litoral 2022-03-04 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion Artículo original Original article application/pdf https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/11212 10.14409/favecv.v20iSuppl..11212 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol. 20 Núm. Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias - Suplemento; 31-39 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol. 20 No. Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias - Supplement; 31-39 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; v. 20 n. Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias - Suplemento; 31-39 2362-5589 1666-938X 10.14409/favecv.v20iSuppl. spa https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/11212/15453 Derechos de autor 2022 Andrea BERENGENO, Valentina MATILLER, Pablo U. DIAZ, Enrique REBELINDO, F. M. RODRIGUEZ, Ayelen ANWEG, P. SILVESTRINI, M. L. CATTANEO, M. B. PERALTA, L. I. DURANTE, Ulises S. NOTARO, S. CAINELLI, P. TABORDA, V. STALDER, L. ETCHEVERS, Florencia REY, Natalia R. SALVETTI, Hugo H. ORTEGA |