"Efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células CHO"

La superfamilia de canales iónicos activados por ligandos (en inglés ligand gated ion channels, LGIC) incluye al receptor de acetilcolina nicotínico (AChR, neuronal y muscular), los receptores del ácido γ-amino butírico (GABAAR), el receptor de glicina (GlyR) y el subtipo 3 de los receptores de sero...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autor principal: Gallegos, Cristina Eugenia
Otros Autores: Barrantes, Francisco J.
Formato: tesis doctoral
Lenguaje:Español
Publicado: 2008
Materias:
lípidos
acetilcolina
nicotínico
Acceso en línea:http://repositoriodigital.uns.edu.ar/handle/123456789/1956
Aporte de:
Repositorio Institucional Universidad Nacional del Sur (UNS) de Universidad Nacional del Sur
id I20-R126123456789-1956
record_format dspace
institution Universidad Nacional del Sur
institution_str I-20
repository_str R-126
collection Repositorio Institucional Universidad Nacional del Sur (UNS)
language Español
orig_language_str_mv spa
topic lípidos
acetilcolina
nicotínico
spellingShingle lípidos
acetilcolina
nicotínico
Gallegos, Cristina Eugenia
"Efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células CHO"
topic_facet lípidos
acetilcolina
nicotínico
author2 Barrantes, Francisco J.
author_facet Barrantes, Francisco J.
Gallegos, Cristina Eugenia
format tesis doctoral
author Gallegos, Cristina Eugenia
author_sort Gallegos, Cristina Eugenia
title "Efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células CHO"
title_short "Efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células CHO"
title_full "Efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células CHO"
title_fullStr "Efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células CHO"
title_full_unstemmed "Efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células CHO"
title_sort "efecto de las variaciones en los niveles de lípidos sobre el tráfico y propiedades del receptor de acetilcolina nicotínico en células cho"
publishDate 2008
url http://repositoriodigital.uns.edu.ar/handle/123456789/1956
work_keys_str_mv AT gallegoscristinaeugenia efectodelasvariacionesenlosnivelesdelipidossobreeltraficoypropiedadesdelreceptordeacetilcolinanicotinicoencelulascho
bdutipo_str Repositorios
_version_ 1764820504891359233
description La superfamilia de canales iónicos activados por ligandos (en inglés ligand gated ion channels, LGIC) incluye al receptor de acetilcolina nicotínico (AChR, neuronal y muscular), los receptores del ácido γ-amino butírico (GABAAR), el receptor de glicina (GlyR) y el subtipo 3 de los receptores de serotonina (5-HTR3). Dentro de esta superfamilia, el AChR es uno de los receptores mejor caracterizados y constituye el prototipo de los LGIC. El AChR muscular es un oligómero heteropentamérico compuesto por dos subunidades α y tres subunidades adicionales β, γ y δ, en una estequiometría α2βγδ en el AChR muscular fetal, mientras que en el adulto la subunidad γ es reemplazada por la subunidad ε. Este receptor se encuentra en la membrana postsináptica de la unión neuromuscular. La unión de su agonista natural, la acetilcolina (ACh) causa la activación del AChR, provocando un cambio conformacional en la proteína, con rápida apertura del canal y la entrada de iones sodio al interior celular. Debido a que el AChR es una proteína integral de membrana plasmática, sus dominios hidrofóbicos transmembrana se hallan en contacto con los lípidos presentes en la bicapa. Estos lípidos interaccionan con diversos dominios del receptor modulando su funcionalidad. En esta Tesis estudiamos los efectos promovidos por alteraciones en los niveles de lípidos celulares tales como el colesterol, la esfingomielina o ceramidas, sobre la síntesis y el tráfico del AChR, así como también sobre su afinidad por ligandos y estabilidad en la membrana plasmática. Todos estos parámetros fueron evaluados utilizando como modelo experimental a las células CHO-K1/A5, una línea celular desarrollada en nuestro laboratorio que expresa en forma heteróloga estable el AChR de tipo muscular adulto (α2βδε). En primer lugar, evaluamos los efectos de la depleción metabólica crónica del colesterol por la droga Mevinolina, potente inhibidor de la enzima microsomal 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A reductasa, enzima limitante en la biosíntesis de colesterol. Se logró determinar que cuando los niveles de colesterol celular son disminuidos por acción de esta droga, el número de AChRs presentes en la membrana plasmática de células CHO-K1/A5 sufre una drástica disminución (46%), con un aumento concomitante en el número de receptores intracelulares. Dichas variaciones se produjeron por inhibición del tráfico exocítico de la proteína con la consecuente retención del AChR a nivel del TGN. De igual modo, observamos que en condiciones controles el AChR se localiza parcialmente en membranas resistentes a detergentes (DRMs o balsas lipídicas) de retículo endoplasmático y Golgi, y que la depleción del colesterol afecta esta distribución, disminuyendo la proporción de AChRs presentes en dichos dominios de membrana. En conjunto, estos resultados nos permitieron concluir que el colesterol modula el transporte de nuevos AChRs hacia la superficie celular, a través de la asociación de dichos receptores con plataformas lipídicas enriquecidas en colesterol. En segundo lugar, estudiamos los efectos ejercidos por las ceramidas, precursoras en la síntesis de esfingolípidos, sobre diferentes propiedades del AChR. Las células se incubaron con diferentes concentraciones de ceramidas de corta o larga cadena, o bien se expusieron a la incubación con esfingomielinasa para evaluar los efectos promovidos por la generación de ceramidas endógenas. Se logró demostrar la efectividad de las ceramidas en modular no sólo el tráfico del AChR sino también su afinidad por ligandos. En cuanto al tráfico del receptor, se demostró que las ceramidas ejercen una modulación dual de este proceso, aumentando o disminuyendo el número de AChRs en la superficie celular, dependiendo de la concentración de lípido utilizada. Con respecto a la afinidad del AChR por el ligando αBTX, se observó un aumento de la misma cuando las células son incubadas a altas concentraciones (25 ó 37.5 μM) de ceramidas, mientras que a bajas concentraciones del lípido (5 μM) no se produjeron tales cambios. Finalmente, se determinó que la generación de ceramidas endógenas por tratamiento con esfingomielinasa también fue efectiva en promover la disminución de los niveles de AChR en la membrana celular, a través del aumento en la tasa de endocitosis del receptor.

Ejemplares similares