articipación del citoesqueleto de actina en etapas tempranas de la infección del virus Rio Negro

El complejo de Encefalitis Equina Venezolana (VEE), género Alphavirus, incluye virus transmitidos por mosquitos que causan brotes periódicos en América del Sur, en caballos y humanos. Dentro del complejo se encuentra el virus Rio Negro (RNV), cuya circulación ha sido reportada en el centro y norte...

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Detalles Bibliográficos
Autores principales: Diaz Bravo, H, Piris, FM, Gil, PI, Paglini , MG, Ghietto , LM
Formato: Artículo revista
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad Nacional Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Secretaria de Ciencia y Tecnología 2025
Materias:
alphavirus
Venezuelan Equine Encephalitis complex
Cytoskeleton
Microfilaments
alfavirus
Complejo de Encefalitis Equina Venezolana
Citoesqueleto
Microfilamentos
Acceso en línea:https://revistas.unc.edu.ar/index.php/med/article/view/50576
Aporte de:
Revista de la Facultad de Ciencias Médicas de Córdoba de Universidad Nacional de Córdoba
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description El complejo de Encefalitis Equina Venezolana (VEE), género Alphavirus, incluye virus transmitidos por mosquitos que causan brotes periódicos en América del Sur, en caballos y humanos. Dentro del complejo se encuentra el virus Rio Negro (RNV), cuya circulación ha sido reportada en el centro y norte de nuestro país, lo que resalta la importancia de estudiar estos virus con relevancia médica-veterinaria. El objetivo de este trabajo fue estudiar la participación del mecanismo de macropinocitosis en la internalización del RNV en células Vero, haciendo énfasis, en la participación del citoesqueleto de actina. Para ello, se fijaron monocapas de células Vero infectadas con RNV (MOI 0,1), a las 4, 8, 12 y 24 hpi y procesaron para inmunofluorescencia utilizando un anticuerpo anti-RNV y Phalloidina/Rhodamina (actina). Asimismo, se emplearon Citochalasina D (CytD) o Jasplakinolide (Jpk), que estabilizan o desestabilizan los microfilamentos, respectivamente. Luego de evaluar la viabilidad celular, se pretrataron monocapas con 2,5 uM CytD o 0,7 uM Jpk y se infectaron con RNV. Los sobrenadantes se titularon por placas de lisis (UFP/ml) y las monocapas se procesaron para inmunofluorescencia. Se calculó en porcentaje de infección para cada condición. En primer lugar, se observó que la infección con RNV afecta drásticamente la morfología celular acompañado de cambios en la organización del citoesqueleto de actina. En segundo lugar, en los cultivos tratados con Cyt D o con JpK, no se observaron diferencias significativas en unidades formadoras de placas (UFP/ml) y en el porcentaje de células infectadas, respecto a sus controles. En conclusión, nuestros resultados indican que la disrupción del citoesqueleto de actina no afecta la entrada viral, sugiriendo que la internalización del RNV no depende de la macropinocitosis, lo que refuerza que los virus del complejo utilizan la endocitosis dependiente de clatrina para ingresar y proporciona información clave para el desarrollo de estrategias terapéuticas.
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El objetivo de este trabajo fue estudiar la participación del mecanismo de macropinocitosis en la internalización del RNV en células Vero, haciendo énfasis, en la participación del citoesqueleto de actina. Para ello, se fijaron monocapas de células Vero infectadas con RNV (MOI 0,1), a las 4, 8, 12 y 24 hpi y procesaron para inmunofluorescencia utilizando un anticuerpo anti-RNV y Phalloidina/Rhodamina (actina). Asimismo, se emplearon Citochalasina D (CytD) o Jasplakinolide (Jpk), que estabilizan o desestabilizan los microfilamentos, respectivamente. Luego de evaluar la viabilidad celular, se pretrataron monocapas con 2,5 uM CytD o 0,7 uM Jpk y se infectaron con RNV. Los sobrenadantes se titularon por placas de lisis (UFP/ml) y las monocapas se procesaron para inmunofluorescencia. Se calculó en porcentaje de infección para cada condición. En primer lugar, se observó que la infección con RNV afecta drásticamente la morfología celular acompañado de cambios en la organización del citoesqueleto de actina. En segundo lugar, en los cultivos tratados con Cyt D o con JpK, no se observaron diferencias significativas en unidades formadoras de placas (UFP/ml) y en el porcentaje de células infectadas, respecto a sus controles. En conclusión, nuestros resultados indican que la disrupción del citoesqueleto de actina no afecta la entrada viral, sugiriendo que la internalización del RNV no depende de la macropinocitosis, lo que refuerza que los virus del complejo utilizan la endocitosis dependiente de clatrina para ingresar y proporciona información clave para el desarrollo de estrategias terapéuticas. The Venezuelan Equine Encephalitis (VEE) complex, genus Alphavirus, comprises mosquito-borne viruses that cause periodic outbreaks in South America, affecting both horses and humans. Within this complex, Río Negro virus (RNV) has been reported to circulate in central and northern Argentina, highlighting the importance of studying these viruses of medical and veterinary relevance. The aim of the study was to investigate the involvement of the macropinocytosis pathway in RNV internalization in Vero cells, with emphasis on the role of the actin cytoskeleton. Vero cell monolayers infected with RNV (MOI 0.1) were fixed at 4, 8, 12, and 24 hpi and processed for immunofluorescence using an anti-RNV antibody and Phalloidin/Rhodamine (actin). Cytochalasin D (CytD) and Jasplakinolide (Jpk), which destabilize and stabilize microfilaments respectively, were used. After assessing cell viability, monolayers were pretreated with 2.5 μM CytD or 0.7 μM Jpk and subsequently were infected with RNV. Supernatants were titrated by plaque assay (PFU/ml), and monolayers were processed for immunofluorescence.  The percentage of infected cells was determined for each condition. Firstly, RNV infection drastically altered cell morphology along with actin cytoskeleton organization. However, CytD or Jpk treatment did not result in significant differences in PFU/ml or percentage of infected cells compared to controls. In conclusion, our findings indicate that disruption of the actin cytoskeleton does not affect viral entry, suggesting that RNV internalization is not dependent on macropinocytosis.  Our findings reveal that viruses within the VEE complex use clathrin-mediated endocytosis for cellular entry, offering critical insights that could inform the development of targeted therapeutic strategies. Universidad Nacional Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Secretaria de Ciencia y Tecnología 2025-11-12 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf https://revistas.unc.edu.ar/index.php/med/article/view/50576 10.31053/1853.0605.v82.n.50576 Revista de la Facultad de Ciencias Médicas de Córdoba.; Vol. 82 (2025): Suplemento JIC XXVI Revista de la Facultad de Ciencias Médicas de Córdoba; Vol. 82 (2025): Suplemento JIC XXVI Revista da Faculdade de Ciências Médicas de Córdoba; v. 82 (2025): Suplemento JIC XXVI 1853-0605 0014-6722 spa https://revistas.unc.edu.ar/index.php/med/article/view/50576/50683 Derechos de autor 2025 Universidad Nacional de Córdoba https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0

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