Epidemiología molecular y genómica comparativa de Leptospira spp. en Argentina
La leptospirosis es una enfermedad infecciosa causada por bacterias del género Leptospira y constituye unazoonosis de amplia distribución mundial. La enfermedad puede ser contraída a través del contacto conambientes contaminados con orina de animales infectados, donde la principal vía de transmisión...
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| Autor principal: | |
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| Formato: | Tesis Doctoral |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
2015
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5801_Varni |
| Aporte de: |
| Sumario: | La leptospirosis es una enfermedad infecciosa causada por bacterias del género Leptospira y constituye unazoonosis de amplia distribución mundial. La enfermedad puede ser contraída a través del contacto conambientes contaminados con orina de animales infectados, donde la principal vía de transmisión es el agua. Los brotes de leptospirosis en Argentina están asociados a cambios climáticos y en particular ainundaciones. A pesar de ello, en nuestro país existe escasa información de la situación epidemiológicaactual de la enfermedad, principalmente debido a la subnotificación de casos y a su persistencia de tipoendémico en los animales. En los últimos años se han reforzado los análisis tendientes al conocimiento epidemiológico de estaenfermedad. En el campo de la epidemiología molecular, se desarrollaron distintos enfoques basados en PCR para la identificación y tipificación de aislamientos de Leptospira, siendo las más utilizadas: MLVA (análisis de VNTRs en múltiples loci) y MLST (tipificación por secuenciación de múltiples loci). Ambastecnologías se basan en la amplificación por PCR, con la diferencia de que en el primer caso se trata deelementos de tipo minisatélite (unidades repetitivas en un rango de 8 a 100 pares de bases) y en el segundocaso los blancos de amplificación constituyen fragmentos de genes conservados o housekeeping que sonsecuenciados para su posterior análisis. Esta última se ha convertido en una técnica líder entre los métodosde tipificación molecular, debido a su alto poder discriminatorio entre distintos aislamientos bacterianos, sufácil aplicación y estandarización, además de la posibilidad de transmitir la información obtenida endistintos laboratorios a través de bases de datos públicas. Asimismo, las secuencias génicas obtenidas sonaplicables a estudios poblacionales y epidemiológicos. En este trabajo se evaluaron y desarrollaron los principales métodos para la tipificación de Leptospira; laevaluación y aplicación de las técnicas MLVA y MLST permitieron identificar genotipos circulantes demanera mayoritaria entre aislamientos argentinos, tanto provenientes de animales de producción como enhumanos. Se logró generar un nuevo esquema de MLST (7LA) para leptospiras patógenas a partir de lacombinación de dos esquemas existentes, optimizando y unificando la metodología de tipificación. Lassecuencias génicas generadas en este trabajo se encuentran publicadas en una base de datos disponible eninternet (http://pubmlst.org/leptospira/), donde además de acceder a las mismas, puede aplicarse lametodología para la determinación de genotipos a partir de nuevos aislamientos, posibilitando lacomparación de cepas a nivel mundial. El nuevo esquema se aplicó no solamente a los aislamientosargentinos, sino que se utilizó en la tipificación in silico a partir de 283 secuencias genómicas deaislamientos y cepas de referencias mundiales que fueron generadas en el marco de un proyecto desecuenciación genómica de este género. Se establecieron 199 genotipos diferentes donde el perfil de MLSTdenominado ST47 agrupó el 34 % de los aislamientos estudiados, similarmente a lo ocurrido para lasmuestras argentinas. Como consecuencia de los análisis filogenéticos y de formación de complejos clonales, se logró estableceruna correlación entre genotipos y serogrupos al que pertenecen los aislamientos, aportando de estamanera una alternativa complementaria al diagnóstico serológico actual. En este sentido, se logró tambiénla generación de un esquema de MLST reducido utilizando tan sólo tres de los siete marcadores delesquema 7LA. El esquema reducido (3LA) permitió la tipificación molecular directamente a partir demuestras clínicas, sin necesidad de contar con el aislamiento, que muchas veces es sumamente difícil delograr debido a las características propias de esta bacteria. Este trabajo permitió entonces profundizar en el conocimiento de la variabilidad genética del género Leptospira y así generar información epidemiológica adecuada que pueda ser utilizada en programas decontrol y métodos de diagnóstico de esta enfermedad, constituyendo el primer trabajo en su tipo realizadoen nuestro país. PALABRAS CLAVE: Leptospira, epidemiología, Multilocus Sequence Typing, serogrupos, genotipos, diversidadgenética. |
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