FluoFagos de segunda generación para detección y determinación de susceptibilidad a antibióticos en Mycobacterium tuberculosis
El diagnóstico actual de la tuberculosis (TB) se realiza por técnicas lentas y laboriosas que llevan desde semanas a meses o con métodos moleculares rápidos pero de alto costo. El desarrollo de FluoFagos, se basa en el uso innovador de fagos que acarrean genes fluorescentes que permiten la detección...
Guardado en:
| Autor principal: | |
|---|---|
| Otros Autores: | |
| Formato: | Tesis doctoral publishedVersion |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
2017
|
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6198_RondonSalazar |
| Aporte de: |
| Sumario: | El diagnóstico actual de la tuberculosis (TB) se realiza por técnicas lentas y laboriosas que llevan desde semanas a meses o con métodos moleculares rápidos pero de alto costo. El desarrollo de FluoFagos, se basa en el uso innovador de fagos que acarrean genes fluorescentes que permiten la detección específica y sensible de Mycobacterium spp. viables y la determinación del perfil de susceptibilidad a antibióticos directamente en muestras clínicas de pacientes con sospecha de la enfermedad. La aparición de fluorescencia define la viabilidad de la bacteria, lo que es crucial para determinar el tratamiento a seguir. En este contexto existe una necesidad apremiante de métodos diagnósticos rápidos y económicos que combinen sensibilidad, especificidad, bioseguridad, y la determinación rápida de susceptibilidad a los fármacos y que puedan ser aplicados en centros de atención primaria de países en desarrollo donde la incidencia de la TB es alta. Por lo anteriormente planteado, el objetivo principal de esta tesis es validar nuevas metodologías basadas en el uso de FluoFagos para la detección y testeo de susceptibilidad a antibióticos en Mycobacterium tuberculosis. Se realizó la incorporación de tags en la cápside del fago para su empleo en la captura de complejos fago-bacteria comprobando su incorporación mediante western-blot, ELISA e inmunoelectromicroscopía. Los lisados de fagos que acarrean el ¨tag¨ se emplearon para recuperar complejos fago-bacteria usando Mycobacterium smegmatis y se evaluó la afinidad de captura mediante microscopía de fluorescencia. Además, se estudiaron algunos parámetros que pueden afectar el proceso de infección entre ellos los métodos de decontaminación de las muestras clínicas empleados de forma rutinaria en los centros de salud. Por otra parte, se comparó la performance de FluoFagos optimizados, reporteros del gen que codifica para la proteína mCherrybomb para la detección y determinación de resistencia a rifampicina en muestras clínicas (esputos), relacionando la sensibilidad y especificidad con los obtenidos por el método de las proporciones usado como método de referencia. Las muestras clínicas empleadas en este estudio fueron facilitadas por el Laboratorio de bacteriología de la TBC (Inst. Vaccarezza-Hospital Muñiz). Finalmente, se propuso realizar el estudio de las características clínico-epidemiológicas de los pacientes incluidos en la presente investigación con el fin de conocer los aspectos más relevantes asociados a la tuberculosis en la República Argentina. Los resultados obtenidos resaltan la utilidad de los FluoFagos para ser implementados como un método rápido, económico, sensible y específico para diagnosticar la tuberculosis y la resistencia a rifampicina directamente en muestras de esputo, facilitando el tratamiento y prevención de la diseminación de cepas resistentes. |
|---|