La arginina quinasa de Trypanosoma cruzi : Estudio de su regulación y utilización de modelos transgénicos
La arginina quinasa cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato entreel ATP y la L-arginina. En este trabajo se reporta modelos de sobre-expresiónexitosos para una enzima endógena, como es el caso de la arginina quinasa. Seobtuvieron 60 veces de sobre-expresión, utilizando el vector de...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Tesis doctoral publishedVersion |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
2002
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3441_Alonso |
| Aporte de: |
| Sumario: | La arginina quinasa cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato entreel ATP y la L-arginina. En este trabajo se reporta modelos de sobre-expresiónexitosos para una enzima endógena, como es el caso de la arginina quinasa. Seobtuvieron 60 veces de sobre-expresión, utilizando el vector de expresión de altaeficiencia pTREX-A. La población transfectada con la arginina quinasa presentó unaumento en la densidad celular y en la tasa de replicación, sugiriendo que losfosfágenos podrían estar involucrados en la división celular. Además, la actividadarginina quinasa aumento continuamente durante la fase exponencial decrecimiento. Se observó una correlación entre la tasa de crecimiento, la actividadarginina quinasa y los niveles de enzima. En el rango de tiempo de cultivoestudiado, los niveles de ARNm mostraron solo cambios menores. La sobreexpresiónde la arginina quinasa presentó una cinética de degradación a lo largode la curva de crecimiento coincidente con el aumento de la enzima endógena yde la actividad, indicando una posible regulación por proteólisis. La incorporación de arginina fue estudiada en epimastigotes de Trypanosomacruzi durante las fases del cultivo in vitro. La incorporación de arginina disminuyócontinuamente desde el 3ro al 14to día. Estas variaciones pueden ser reproducidasutilizando medio condicionado o medio fresco. El ayuno de arginina, la densidadcelular y la disponibilidad de Fuentes de carbono, también afectaron laincorporación. En tripomastigotes, el estadio infectivo no replicativo, la actividad yexpresión arginina quinasa fueron 2.2 veces superior a la correspondiente aepimastigotes del 7mo día, y la incorporación de arginina fue al menos 30 vecesmenor en tripomastigotes que en epimastigotes del 7mo dia. Además unadisminución reversible del 40 % de la arginina incorporada fue observado cuandocélulas del día 3 fueron tratadas con el agente antimitótico, hidroxi urea. Estosresultados sugieren una relación entre la incorporación de arginina, la tasa deduplicación celular, y el aumento en la actividad arginina quinasa. |
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