Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad
La glicoproteína epididimaria de rata "DE" se asocia al espermatozoide durantela maduración, y participa en el proceso de fusión de gametas a través desitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. Con el fin decomprender los mecanismos involucrados en la participación de D...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Tesis doctoral publishedVersion |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
2001
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3358_Ellerman https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n3358_Ellerman_oai |
| Aporte de: |
| Sumario: | La glicoproteína epididimaria de rata "DE" se asocia al espermatozoide durantela maduración, y participa en el proceso de fusión de gametas a través desitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. Con el fin decomprender los mecanismos involucrados en la participación de DE en dichoproceso, se estudió la importancia de la estructura de DE para la actividad dela proteína. El clonado del ADNc de DE permitió obtener la secuencia de los 227 aminoácidos (aa) de la proteína. El análisis de dicha secuencia indicó que DE pertenece a la familia CRISP (cystein rich secretory proteins), y lapresencia de 16 cisteínas en la molécula. El ADNc fue utilizado luego paraexpresar la proteína recombinante en bacterias (recDE). El estudio de recDE yde la proteína nativa deglicosilada, indicó que la actividad biológica residiría enla porción peptídica de la molécula. Por otro lado, el análisis del estado deoxidación de las cisteínas indicó que la mayoría de ellas formaría puentesdisulfuro, y que la ruptura de los mismos afectaría la actividad de la proteína. La expresión de distintos fragmentos recombinantes de DE y su empleo enensayos biológicos, reveló que la actividad de la proteína residiria en la regióncomprendida entre los aa 62-158. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que la inmunización de ratascon proteína DE produce una respuesta inmune y una inhibición significativade la fertilidad. El presente trabajo indica que los mecanismos responsables dedicha inhibición involucrarían la entrada de anticuerpos anti-DE al tractoreproductivo, su interacción con los espermatozoides, y la disminución de lacapacidad fertilizante de los mismos, abriendo la posibilidad del potencial usode DE para el desarrollo de un método inmunológico de regulación de lafertilidad. Dado que para ello es necesario poder disponer del antígeno engrandes cantidades, la proteína recombinante fue utilizada en ensayos deinmunización, que indicaron que recDE, al igual que la proteína nativa, escapaz de producir una respuesta inmune y una reducción de la fertilidad. Conel fin de investigar la posible aplicación de este método inmunológico en elhombre, la capacidad inmunogénica de la proteína humana homóloga a DE,proteína ARP, fue estudiada en un modelo de primates no humanos,observándose la inducción de una elevada respuesta inmune en los animalesinmunizados. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo contribuyen alesclarecimiento de los mecanismos involucrados en la participación de DE enel proceso de fusión de gametas, y apoyan el potencial uso de esta proteína ysus homólogos para el desarrollo de un método inmunológicode regulación dela fertilidad tanto en animales como en el hombre. |
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