Estudios sobre el proceso de regulación reductiva de la Fructosa-1,6-Bisfostasa cloroplastídica de colza (Brassica napus)
En las plantas, la Fructosa-1,6-Bisfosfatasa de cloroplastos (CFBPase) cataliza ladefosforilación irreversible de la fructosa-1,6-fosfato en el ciclo de Benson-Calvin. La CFBPase es una enzima clave en la regulación de la asimilación del C02 y su actividadespecífica es fuertemente regulada por luz,...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Tesis doctoral publishedVersion |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
1998
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3057_RodriguezSuarez http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n3057_RodriguezSuarez_oai |
| Aporte de: |
| Sumario: | En las plantas, la Fructosa-1,6-Bisfosfatasa de cloroplastos (CFBPase) cataliza ladefosforilación irreversible de la fructosa-1,6-fosfato en el ciclo de Benson-Calvin. La CFBPase es una enzima clave en la regulación de la asimilación del C02 y su actividadespecífica es fuertemente regulada por luz, a traves de una cascada reductiva via Tiorredoxina. Los principales objetivos fueron: i) obtener una CFBPase recombinante útil como modelo de la contrapartecloroplastídica,ii) empleando mutagénesis sitio-dirigida, caracterizar el rol de las cist(e)inas en suestabilidad estructural, modulación y actividad catalítica,iii) analizar la multiplicidad de loci para la CFBPase en el alotetraploide B.napus y ensus parentales diploides B.campestris y B.oleracea. Construímos una cDNA library de expresión de hojas de colza y obtuvimosvarios clones codificando la CFBPase. Luego expresamos y purificamos de E.coli laproteína recombinante, que mostró alta actividad enzimática. Su caracterizaciónestructural y funcional estableció que es virtualmente idéntica a la contrapartecloroplastídica. Preparamos varias mutantes sitio-dirigidas por reemplazo de cisteínasdiferencialmente afectadas en sus propiedades regulatorias, algunas de las cualesresultaron parcial o constitutivamente activadas. Determinamos que la Cys157 es críticay que las Cysl74 y 179 también son participantes de la modulación reductiva. Proponemos un mecanismo que involucra tres residuos Cys, y donde se requiere laformación de diferentes disulfuros en las distintas subunidades del homotetrámero. Laactividad catalítica no disminuyó por el reemplazo de ninguna de las siete Cys de laenzima. También encontramos que existen al menos dos loci por complemento haploidepara la CFBPase en B.napus y en sus parentales B.oleracea y B.campestris. Ambos loci seexpresan en hojas verdes y las enzimas recombinantes poseen actividades muysimilares. En conjunto, estos análisis podrían tener un elevado impacto en los estudiosorientados a manipular la velocidad de asimilación de C02 y la partición "fuente/sumidero” del fotosintato en una especie económicamente importante como lacolza. |
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